MTS比色法、XTT比色法、CCK-8法
MTS[3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-5（3-carboxymethoxyphenyl）-2-（4-sulfopheny）-2H-tet-razolium, inner salt]是一種四唑類化合物，它與MTT的應用原理相同，即被活細胞線粒體中的多種脫氫酶還原成有色的水溶性產物，其顏色深淺與細胞活性呈高度相關。MTS比MTT更為方便，精簡了實驗過程。
【材料】
1. MTS 用pH 6.0的PBS配成300mmol/L;
2．吩嗪二甲醋硫酸鹽（PMS) 用PBS配制成220mmol/L,4℃避光可保存20天；
3. MTS/PMSMTS與PMS按1：1混合（臨用時混合）；
4. K562細胞（靶細胞），淋巴細胞（效應細胞）。
【方法】
1．在96孔細胞培養板中（用前紫外線照射4小時），實驗孔加效、靶細胞各100ul，效：靶=10～20：1；靶細胞對照孔只加靶細胞、培養液100ul。每個標本3個復孔，37℃ 5% C02孵箱中作用4小時。
2．每孔加MTS溶液20ul，繼續孵育2小時。
【結果】
選擇490nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果。
XTT比色法（NK細胞毒試驗）
【原理】
XTT是與MTT類似的四唑氮衍生物，可被活細胞線粒體脫氫酶還原成水溶性的棕色產物，當XTT與電子耦合劑共同使用時，產物的生成量與細胞的增殖程度呈正相關。用XTT代替MTT可省去溶解還原產物結晶的步驟。
【材料】
1. XTT用60℃預熱培養液配制成6.6mmol/L，過濾除菌，現配現用。
2．吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)用PBS配制成220mmo1/L,4℃避光可保存20天。
3. XTT/PMS:XTT，與PMS按1：1混合（臨用時混合）。
4. K562細胞（靶細胞）,NK細胞（效應細胞）。
【方法】
1．在96孔細胞培養板中（用前紫外線照射4小時），實驗孔加效、靶細胞各100ul，效：靶=10：1;靶細胞對照孔只加靶細胞、培養液100ul。每個標本3個復孔，37℃ 5% C02孵箱中作用4小時。
2．于終止培養前2小時，每孔加入XTT/PMS 20ul，混勻后再培養2小時。
【結果】
在酶標儀上450nm處測定光吸光度，參考波長為655 nm。計算Sl：Si=試驗孔OD均值／對照孔OD均值。
【注意事項】
1. XTT試劑應現用現配。
2．細胞洗滌要充分，操作要無菌、輕柔，保持細胞活性。
CCK-8法（CTL細胞毒實驗）
【原理】
所謂CCK-8 (cell counting Kit-8 )法的細胞活性檢測試劑中含有WST-8，其化學名為：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-(4-硝基苯基）-5-(2,4-二磺酸苯）-2H-四唑單鈉鹽，它在電子載體1-甲氧基-5甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS )的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產物（Formazan)。生成的甲臜物的數量與活細胞的數量成正比。用酶聯免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。WST-8比MTT,XTT,MTS更加穩定，檢測線性范圍更寬，靈敏度更高，但價格較貴。
【材料】
1．培養液中靶細胞通常選用傳代的腫瘤細胞，配制成（1～3)x106/ml細胞懸液；
2．效應細胞CTL可用受檢患者外周血液中分離所得的單個核細胞，洗滌后調整細胞數；
3.CCK-8；
4.RPMI 1640。
【方法】
1．常規方法分離淋巴細胞，在96孔細胞培養板中按照淋巴細胞與腫瘤細胞200:1的效靶比例使兩種細胞接觸。如果腫瘤細胞為貼壁細胞，則將腫瘤細胞用培養液配成1x103/ml的細胞懸液，每孔加入細胞懸液100ul（即100個腫瘤細胞，靜置5～10分鐘，待細胞初步貼壁后，再放入5% CO2的細胞培養箱中培養24小時。如每孔中含腫瘤細胞為200個，則應加入淋巴細胞4x104個淋巴細胞，即每孔加入4x105/ml淋巴細胞懸液100 ul。
2．用含20％小牛血清的RPMI 1640培養液將每孔液體體積補至200ul，將每孔細胞培養板放入5% CO2的37℃細胞培養箱內培養24～48小時。
3．每孔加入20ul CCK-8溶液。用加了相應量細胞培養液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。在細胞培養箱內繼續孵育1小時。
【結果】
用酶標儀在450nm測定吸光度值。
【注意事項】
1．如果細胞培養時間較長，一定要注意蒸發的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發。
2．本方法的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會干擾檢測，需設法去除。
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