3H-TdR摻入法檢測淋巴細胞增殖
胸腺嘧啶核苷(TdR）是DNA特有的堿基，也是DNA合成的必需物質。用核素3H標記TdR即3H-TdR作為DNA合成的前體能摻入DNA合成代謝過程，通過測定細胞的放射性強度，可以反映細胞DNA的代謝及淋巴細胞增殖情況。
【材料】
1. 3H-TdR（比活性為2～10Mci/mg分子）3H-TdR工作液：將1Mci/ml溶液以生理鹽水稀釋成100 uci/ml，于4℃保存備用。臨用時再用培養液稀釋成10 uci/ml溶液，3H-TdR一般臨用時稀釋；
2．閃爍液 PPO(2,5-二苯基噁唑）,POPOP(1,4-雙-15-苯基噁唑）。ppo 5.Og popop 0.1～0.3g加二甲苯或甲苯至1L;POPOP加入少量二甲苯在37℃水浴上溶解后，再加PPO,然后補足二甲苯。配好的閃爍液需要閉光。閃爍液配制和檢測的樣品有關；
3．其他5％三氯醋酸；3％冰醋酸；濃甲醛;30%H202液等。
【方法】
1．常規分離淋巴細胞（可來自外周血，脾細胞等）。
2．洗滌后用10% FCS RPMI 1640調整合適細胞數（2x106/ml)。
3．加入96孔培養板中，2x105/100 u1/孔，每組設3個復孔。
4．加入最適劑量PHA或Con A ,100 ul/孔，同時設不加PHA或Con A陰性對照，一般每孔最終體積為20O ul（細胞終濃度1x105),37℃,5% C02孵育，66小時（20小時后加藥處理）。
5．每孔加入0.5～1 uci 3H-TdR(50 u1）繼續培養6～12小時。
6．培養結束后，離心吸去上清液，用200ul冷PBS洗滌兩次（2000r/min離心10分鐘）用冷PBS可以終止反應。
7．用多頭細胞收集儀收集樣品于玻璃纖維濾紙（膜）上。至少洗滌2次。
8．取出濾膜，排列好，置于干燥箱中，60～80℃,30分鐘烘干（75℃烤箱過夜）。對號剪下各個濾膜片，然后將濾膜放入裝有5 ml的閃爍液中（貼細胞的面朝上）。閃爍瓶暗處放置15分鐘。
【結果】
用液閃儀計數（測定放射性cpm值）。增殖水平直接用每分的脈沖數cpm值表示，再按標本淋巴細胞計數結果，校正成每百萬淋巴細胞的脈沖數（cpm/106淋巴細胞）。取各管測定數的平均值。也可用刺激指數（SI）表示試驗結果
以SI表示結果時，一定要設置相同數量培養孔的對照（即不加Con A/PHA)。而以cpm絕對值表示（cpm/106淋巴細胞）則可以不用設對照管。因為對照的cpm與本底比較接近，不同樣品之間的少許差別也不易確定其意義。
【注意事項】
1．采用手工裁剪大小合適的玻璃纖維膜。廢液瓶和真空泵之間最好加一個緩沖瓶，不要直接將真空泵上的橡膠管連接到廢液瓶上，以免放射性廢液進入橡膠管。
2．在加入閃爍液之前必須烘干濾膜，但加入一定量的醇類（如無水乙醇），則可容納少量的處理后所殘留的水分，但也仍需烘至接近干燥的程度，否則將發生混濁而無法測定。
3．絲裂原在正式實驗前均需摸索最適劑量或亞適劑量。廠家和批號不同絲裂原作用常有很大差別。根據實驗需要，不同來源淋巴細胞（胸腺、脾臟、淋巴結、扁桃體、外周血等）均應進行最適細胞濃度、培養時間和刺激物濃度的摸索。
4．在細胞分裂周期中只有S期合成DNA，故在S期加入3H-TdR，加入過早不但不能被細胞攝取，反而被降解為胸腺嘧啶，不能作為合成DNA的原料。一般在培養終止前6至16h加入3H-TdR，其摻入量高。
5. 3H-TdR需準確加樣，嚴格控制實驗條件，沖洗抽濾去除未摻入的3H-TdR要充分。